補體溶血活性是血漿或血清中補體的經典和替代途徑的功能測試。經典途徑方法 (CH50) 基于在 Ca++ 和 Mg++ 存在下裂解致敏的綿羊紅細胞。當懷疑補體缺失或缺乏時,它作為篩查試驗是有幫助的。該測試對通路任何組成部分的減少、缺失和/或不活躍敏感。
該方法也適用于評估藥物對補體成分抑制或消耗的影響。此外,根據(jù)國際標準 ISO 10993-4:2017,可以評估生物材料和醫(yī)療器械在血液、血漿或血清與生物材料接觸后的血液相容性。生物材料或藥物激活補體系統(tǒng)會導致補體蛋白的消耗,從而降低 CH50 水平。
測量經典途徑補體活性??梢苑治鰜碜砸韵挛锓N的血漿或血清樣品:人、豚鼠、倉鼠、大鼠、兔、牛、豬、恒河猴和比格犬。該試劑盒僅供實驗室研究使用,不可用于診斷或治療程序。
將紅細胞懸液與連續(xù)稀釋的血清或血漿在 37 oC 下孵育 30 分鐘。補體系統(tǒng)的激活將導致溶血。孵育后,將樣品離心以獲得上清液。上清液中的游離血紅蛋白濃度與補體活性成正比,通過分光光度計在 415 nm 波長下測量。繪制血漿稀釋因子與溶血程度的關系圖可以計算 CH50(即稀釋血清以獲得 50% 的紅細胞裂解)。
陽性參考是裂解液誘導的完全裂解,陰性參考是與稀釋緩沖液孵育后獲得的。
該試劑盒旨在通過小樣品 (25 μL) 的經典途徑測定補體活性,并且可以在 96 孔(圓底)微孔板中進行。該測定也可以在微量離心管中進行。